环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞会侵袭转移能力的影响

摘要：意在探究环状氧合酶-2类固醇塞来昔布对人胃癌SMMC-772l稀胞波及移转到控制能力的制约，为塞来昔布在诊断上疗程胃获取分析方法有依据。方法有分析方法有灌注稀胞培植技术培植人胃癌稀胞株SMMC-7721，并以重建基底内层的波及试验、趋化民族运动试验、对层粘连蛋白的浸润试验以及损害刮擦测试捕捉到各不相同含有量塞来昔布对人胃癌SMMC-7721稀胞波及、移转到控制能力的制约。结果塞来昔布作运用于人胃癌SMMC-7721稀胞后，其稀胞表层不下显着减少，而民族运动抑制作用不下及波及抑制作用不下显着下跌，与非常少相较劣别大多有统计学含意，且塞来昔布含有量与稀胞表层不下，民族运动抑制作用不下及波及抑制作用不下大多有相关性。结论环状氧合酶-2类固醇塞来昔布能显着抑制作用人胃癌SMMC-7721稀胞的表层、民族运动及波及控制能力，故可阻抑胃癌稀胞的移转到，可能是公共卫生胃癌之中风的不可忽视候选药物之一。

胃癌的波及移转到是引致胃癌病患身体状况之中风和死亡的主要原因。积极探索阻碍胃癌波及移转到的有效途径，视作大幅度降低其死亡不下的有鉴于此。随着环状氧合酶-2(COX-2)在暴发之中不可忽视地位的断定，COX-2类固醇能否运用于诊断疗程胃癌仍要逐渐视作数据分析的热门话题。本数据分析以灌注培植的人胃癌稀胞株SMMC一7721为对象。捕捉到COX-2类固醇塞来昔布对人胃癌SMMC一7721稀胞波及控制能力的制约。称赞塞来昔布运用于诊断胃癌疗程的可能性。为其诊断分析方法有获取分析方法有基础和方法有学依据。

1 涂料和方法有

1.1涂料

人胃癌稀胞株SMMC一7721、NIH／3T3稀胞株由本测试室完好，塞来昔布为辉瑞一些公司系列产品，Boyden四人美国进口Millipore一些公司。培植液GIBCORRL一些公司系列产品，胎牛小鼠杭州四季青生物一些公司系列产品，酶标仪BIORAD一些公司系列产品。Matrigel(人工基底内层胶)美国进口BD一些公司

1.2稀胞培植和药剂配制

人胃癌SMMC-7721稀胞株，灌注传代培植，用含有10％胎牛小鼠(FBS)的RPMI 1640培植液，安放37℃、5％CO2稀胞培植箱之中培植48 h，每24 h换培植液1次。待培植瓶底大块胃癌稀胞后，弃去培植液，用0.25％粘附消化系统SMMC-772l胃癌稀胞，含有10％胎牛小鼠的RPMI 1640培植液调整稀胞含有量为lxl06／ml。取对天内干季稀胞运用于测试。将塞来昔布水溶剂灭菌的DMSO，塞来昔布储存液含有量都为20、60、100μmol/L，的工作液，设0μmol/L为印证。

1．3 SMMC-7721稀胞与刚的表层测试

以每上端50 μg/mL FN溶剂40μl特罗斯季亚涅齐96上端稀胞培植板。4℃下避光旅店。取lxl06/ml的SMMC-7721人胃癌稀胞接种于已特罗斯季亚涅齐FN的96上端培植板之中。每上端100μl，设5个复上端。测试组成员将塞来昔布含有量为20、60、100μmol/L 3个低剂量组成员加人，不塔瓦来昔布为非常少，以培植液代替SMMC-7721稀胞设为空白非常少。安放37℃、5％CO2饱和湿度下的培植箱内孵蛋2 h。停止妥善处理后，PBS溶剂冲洗两遍，投身100μl/上端0．5％结晶青色染液，着色10min。PBS溶剂冲洗4次，37℃干燥，每上端投身1％醋醇乙醇100μl，混匀后静置10 min。在酶联仪无线电波570nm无线电波处测出各上端吸光度值(OD)，按下列式子计算稀胞表层抑制作用不下：抑制作用不下(％)=1-(测试组成员OD-空白非常少OD)/(非常少OD-空白非常少OD)x100％。

1．4稀胞的搬迁测试(损害刮擦测试)

将对天内干季SMMC-7721人胃癌稀胞接种于12上端培植板之中，成型稀胞单层。用移液器滴头沿培植板底部椭圆形“一”方形样单层培植稀胞,镜下记录样区相较一段距离，更换体积分天内为1％胎牛小鼠的RPMI1640培植液,培植24 h更换体积分天内为10％胎牛小鼠的RPMI 1640培植液，再次培植48h，捕捉到并摄影。每组成员平行4个样本。测试重复3次。

1．5稀胞波及测试

概要Albini等[2]所用方法有，将作为有机化学趋磷的NIH3T3稀胞培植上清液0.2 ml投身Boyden四人的下室，在上下室之间用上端径8μm的聚碳醇酯微上端滤内层分开，该内层自行涂Madrigel溶剂40μl(含有Matrigel 120μg)，并在37℃聚合30 min以重建基底内层。将含有含有量都为20、60、100μmol/L的稀胞悬液200μl加到Boyden上室之中，在37℃、5％C02培植箱孵蛋6 h后放到滤内层，擦尽内层上Matrigel及未越过的稀胞。丙酮分开1min，HE着色。200倍光学光学仪器下随机记天内5个视野越过聚碳醇酯内层的稀胞天内，取大多值，结果以抑制作用不下同上示。设不塔瓦来昔布为非常少，每组成员设5个平行Boyden小塞。抑制作用不下=[(非常少穿内层稀胞天内-测试组成员穿内层稀胞天内)／非常少穿内层稀胞天内]x100％。

1．6稀胞灌注民族运动测试

聚碳醇酯微上端滤内层自行不涂Madrigel溶剂，其余同稀胞灌注波及测试。

1．7统计学妥善处理

所有天内值大多以大多天内±标准劣同上示，组成员间劣异比起运用于t检验。P

2 结果

2．1塞来昔布对SMMC-7721与FN表层的制约(同上1)

同上1 塞来昔布对SMMC-7721稀胞与FN表层抑制作用不下的制约（%）*同上示各测试组成员间比起P

人胃癌稀胞SMMC-7721与纤连蛋白之间表层力最弱，塞来昔布作用2 h后。稀胞表层控制能力显着减少。各低剂量组成员与非常少相较起，劣异大多有确定性(p

2．2塞来昔布对SMMC-7721稀胞搬迁的制约

损害刮擦测试显示，非常少稀胞样区72 h着有大量稀胞进入，而塞来昔布组成员的稀胞搬迁却不显着(由此可知1)，定时塞来昔布对胃癌稀胞的搬迁有显着的组成员胺。

由此可知1 损害刮擦测试检测稀胞搬迁控制能力A：非常少；B：塞来昔布妥善处理组成员

2．3塞来昔布对SMMC-7721稀胞波及、民族运动控制能力的制约(同上2)

测试各低剂量组成员与非常少对稀胞波及、民族运动控制能力的制约比起，稀胞波及、民族运动个天内及抑制作用不下劣异兼具确定性含意(P

*同上示各测试组成员间比起及测试组成员与非常少比起P

3 讨论

波及移转到是不可忽视的生物化学特性，也是疗程之中面临的最大的课题和防治重点。Liotta等[3]提出恶性波及的三步哲学思想，第一步稀胞与稀胞外组成员分(ECM)浸润；第二步稀胞本身或抑止宿主稀胞分泌蛋白水解酶分解组成员分；最后一步即趋化介导的稀胞民族运动和搬迁。

近十年数据分析推断出，COX-2在多种消化系统道之中过同上达[4、5]，且与胃稀臌癌的暴发、工业发展和预后关系密切。Koga[6]等检测44亦然开刀截肢的HCC其组成员织与癌旁非癌其组成员织及7亦然仍要常胃其组成员织之中COX-2的同上达，结果推断出更高变异的HCC较低变异的HCC或癌旁非癌其组成员织COX-2的同上达显着增最弱，癌旁非癌其组成员织胃稀胞之中COX-2椭圆形散在最弱同上达，仍要常胃其组成员织COX-2椭圆形弱阳性同上达。Kondo等[7]数据分析推断出，HCC病患开刀截肢后,残留胃其组成员织之中COX-2更高同上达则会随之而来癌稀胞更需注意暴发微移转到而使其再一生存和散播,引致胃癌的之中风，定时HCC的预后劣，可能与COX-2的更高同上达有关。Abiru等[8]推断出胃稀胞内皮细胞(HGF)可以通过促进波及而慢速胃癌稀胞移转到，分析方法有药物或NS-398，一种抗原COX-2类固醇，却可以扫除HGF对HepG2的这种作用而不制约稀胞的适应性。这些数据分析结果为功能性COX-2类固醇分析方法有于胃癌的防治获取了分析方法有依据。

本数据分析表层测试断定，测试各低剂量组成员塞来昔布对胃癌稀胞与FN表层不下与非常少比起，劣异兼具确定性含意，说明塞来昔布能抑制作用SMMC-7721稀胞表层。此外，在波及与移转到的步骤之中，稀胞不必越过血管壁、腔静脉的基底内层才能进入血管壁和腔静脉。达到移转到的意在。因此癌稀胞受趋化主因趋化并越过基底内层的控制能力是波及和移转到的无疑之一。我们运用于NIH／3T3上清作为趋化主因，Matrigel作为人工基底内层构建Boyden波及四人，稀胞表层于人工基底内层后，消化系统分解基底内层并在趋化主因抑止下越过基底内层，最后附着在滤内层另一面。从而通过计天内稀胞天内揭示稀胞波及控制能力。本数据分析断定塞来昔布对SMMC-7721稀胞波及、民族运动大多兼具组成员胺。

从以上测试结果我们可以看到塞来昔布对SMMC-7721稀胞的表层、民族运动、波及控制能力大多有显着的组成员胺，从而阻抑稀胞的移转到，为诊断上塞来昔布防治胃癌的移转到获取了分析方法有依据。

参考文献：

[1] 王旦;陈向荣;吴建胜整合素α6β与胃癌波及移转到的关系[J]-实用Journal,2005,21(16):1850-1.

[2] Albini A ,Iwamoto Y，Kleinmam HK,et a1．A rapid in vitro assay for quantization the invasion potential oftumor cells[J]．Cancer Res，1987，47(12)：3239-45．

[3]Liotta LA. Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix:rboads memorial award lecture[J]. Cancer Res，1986，46：1．

[4]朱祖国，刘光大，杜卫兵，等．环状血红蛋白-2基因异常同上达与前列腺癌移转到的关系[J]．内陆地区医科大学学刊，2006，26(10)：1408-11．

[5]陈娜娜，吴曙光．双氯芬醇抑制作用胃癌稀胞增殖和促进环状氧合酶-2mRNA作用的同上达[J]．内陆地区医科大学学刊，2006，26(6)：814-17．

[6]Koga H，Sakisaka S，Ohishi M，et a1．Expression of cyclooxygenase in human hepatoeellular carcinoma：relevance to tumor dedifferentiation[J]．Hepatology，1999，29(3)：688-96．

[7]Kondo M，Yamamoto H，Nagano H，et a1．Increased expression of COX-2 in nontumor liver tissIIe is associated with shorter disuse-free survival in patients with hepatocellular carcinoma[J]．Clin Cancer Res，1999，5(12)：4005,12．

[8]Abiru S，Nakao k， lchikawa T，et a1．Aspirin and NS-398 inhibit hepatoeyte growth factor-induced invasiveness of human hepatoma cells[J]．Hepatology，2002，35(5)：1117-24．

编辑： 丽芳